بیان استرپتوکیناز نوترکیب استرپتوکک گروهA در باکتری اشرشیاکلی

  زمینه: استرپتوکیناز A از جمله پروتئین­های ترشحی استرپتوکک پیوژن است که قدرت آنتی­ژنیک دارد . از این پروتئین می­توان جهت سیال کردن چرک در ذات­الریه و ورم مفصلی چرکی و همچنین به عنوان آنتی­ژن برای تشخیص عفونت­های استرپتوککی گروه A استفاده کرد.   هدف: مطالعه به منظور تولید استرپتوکیناز استرپتوکک گروه A نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی انجام شد.   مواد و روش­ها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختصاصی و استفاده از روش PCR ، ژن استرپتوکیناز A از استرپتوکک پیوژن تکثیر و در ناقل پلاسمیدی pET32a جهت بیان کلون شد . پلاسمید SKA - pET32a وارد اشریشیاکلی سویه BL21-DE3-plySs شد. تولید پروتئین با القا توسط IPTG و بهینه­سازی شرایط انجام شد. پروتئین نوترکیب با کیت Ni-NTA خالص و مقدار پروتئین نوترکیب تولید شده با روش برادفورد اندازه­گیری شد. آزمایش وسترن بلات برای تأیید پروتئین نوترکیب انجام شد . ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده با روش سنگر تعیین شد.   یافته­ها: ترادف ژن تکثیر شده که در پلاسمید pTZ57R/T کلون شده بود با ترادف ثبت شده برای ژن استرپتوکیناز A در بانک ژن، یکسان بود. مقدار پروتئین تولید شده با استفاده از روش برادفورد 3 میلی­گرم بر میلی­لیتر به دست آمد. پروتئین استرپتوکیناز نوترکیب تولید شده با سرم موش واجد آنتی استرپتوکیناز A واکنش داد. پروتئین تولید شده وزنی در حدود 67 کیلو دالتون داشت و خاصیت آنتی­ژنیک خود را به خوبی حفظ کرد.   نتیجه­گیری: بیان پروتئین نوترکیب استرپتوکیناز A در میزبان اشرشیاکلی نیز امکان­پذیر است. بنابراین می­توان از آن در تشخیص بیماران مبتلا به عفونت­های استرپتوککی گروه A به جای آزمایش­های آنتی­استرپتولایزین O (ASO) و استرپتولایزین O ( SLO ) استفاده کرد.